AG尊龙凯时提供的婴儿利什曼虫探针法荧光定量PCR试剂盒（CAT#: 15-18620）具备出色的检测能力与便捷性，专为检测婴儿利什曼虫（Leishmania infantum）而设计。该原虫可引发内脏利什曼病，研究表明，感染人类或犬只时，往往表现为无症状，但潜在地参与疾病传播。

产品特点

本试剂盒特点如下：

• 即开即用，用户仅需提供DNA模板。
• 附带阳性对照，有助于区分假阴性样品。
• 反应迅速，灵敏度高。
• 足够支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR，仅供科研用途。

规格及成分

本试剂盒包含以下成分：

• 2×Probe qPCR Mix（编号：190504a，规格：600μL）
• DEPC-H2O（编号：180701，规格：1 mL）
• 婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液（编号：15-18620yp，规格：90μL）
• 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，编号：18620pc，规格：50μL）
• 使用手册（编号：15-18620sc，1份）

运输及保存

本产品应低温运输，保存条件为-20℃，有效期为一年。阳性对照须单独保存，避免污染其他试剂。同时，用户需自行准备样品DNA及超纯水。

使用方法

一、DNA提取

使用适宜的方法提取纯化样品DNA，确保与市场上大多数核酸提取试剂盒的兼容性。

二、稀释标准曲线样品

请在独立区域进行阳性对照的稀释操作，以避免样品污染：

1. 标记6个离心管，编号为7至2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），充分震荡，得1×10⁷拷贝/μL样品。
4. 重复此步骤，逐步稀释至6个浓度。

三、试剂配制

如待检样品数为N，则准备N+2个qPCR管，加入以下成分：

• 2×Probe qPCR Mix: 各10μL
• 婴儿利什曼虫引物-探针混合液: 各15μL
• DEPC-H2O: 65μL

四、添加模板

向qPCR管中加入2μL模板，按照阴性对照、待测样品和阳性对照的顺序操作，随后离心30秒并立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放入PCR扩增仪器，设置以下扩增程序：

• 预变性：95℃，3分钟
• qPCR反应：40个循环，95℃ 15秒，58℃ 20秒，72℃ 20秒（于此阶段采集FAM通道的荧光信号）

六、结果分析

若制作标准曲线，可根据阳性对照的Ct值推算样品DNA浓度。未制作曲线的情况下，检测结果可参考以下标准：

• 阳性对照：Ct值<30，有明显指数增长。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值。
• 样本阳性：Ct值<35，产品有效； Ct值38或无Ct值，结果为阴性；在35-38范围内则需复检。

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